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讲解免疫荧光组织化学技术的组织处理如何进行

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(一)标本的类型:

1.涂片和印片:血液、细菌培养物、脑脊液、体腔渗出液和细胞悬液等均可简单地涂抹在玻片上,干燥固定后就可用于荧光抗体染色。脑脊液、脏器(肝、脾、淋巴结等)、细菌菌落或尸体病变组织可把新鲜切面压印于玻片上做成印片,经固定后再染色。

2.组织切片:最常用。包括:

①冷冻切片:首选的制片方法。优点:操作简单,组织的抗原性保存好,自发荧光较少,特异荧光强,同时适用于不稳定的抗原;缺点:组织结构欠清晰;

②石蜡切片:研究形态学的主要制片方法,它不但是观察组织结构的理想方法,而且可进行回顾性研究。其优点是组织细胞的精细结构显现清楚,但对抗原的保存量不如冷冻切片,并有组织自发荧光和非特异性荧光,需加酶消化处理。

3.细胞培养标本:细胞在玻片上培养,形成单层,固定后用作抗核抗体等检测的抗原片。还可使细胞单层生长在玻片上,再用病毒或患者标本感染,然后固定,用荧光抗体染色法检测病毒。

4.活细胞染色:检查淋巴细胞表面抗原以及免疫球蛋白受体、癌细胞表面抗原、血清中抗癌细胞抗体等,均可用活细胞荧光抗体染色法。当同时观察细胞表面两种抗原的分布和相互关系时,可用双标记法进行染色。

(二)标本的保存

标本在固定干燥后,最好立即进行荧光抗体染色及镜检。如必须保存时,则应保持干燥,置4℃以下保存。一般细菌涂片或器官组织切片经固定后可保存1个月以上。但病毒和某些组织抗原标本抗原性丧失很快,数天后就失去其抗原性,需在-20℃以下保存。

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